（一）病原学检查
从粪便中查到钩虫卵或孵出钩蚴即可确诊。
1．直接涂片法 操作方法简单，但因取粪量少检出率低，轻度感染者易遗漏，常需一送三检才能提高检出率。
2．饱和盐水浮聚法 较易检出钩虫卵，因钩虫卵比重轻，在比重较高的饱和盐水内漂浮表面，较易检查且检出率也较直接涂片法高，尤其是对轻度感染者。但若在操作过程中稍有疏忽，如翻揭玻片有滴漏现象，亦可影响检出效果。
3．厚涂片法（Kato法）、改良加藤厚涂片法（Kato-Katz法） 因取粪量多、操作简便检出率高，且改良加藤厚涂片法还能定量，为目前国内外常用的粪检方法。但由于钩虫卵的卵壳较薄，透明时间过长可因虫卵变化不易识别而漏检。因此，操作时要掌握适当的温度、湿度及透明时间，注意钩虫卵在厚涂片中的形态变化特征。
钩虫卵呈椭圆形，卵壳薄而无色透明，在低倍显微镜下仅呈一条轮廓线。在新鲜粪便中的钩虫卵，内含4~8个灰色颗粒细胞，以4个为最常见。卵壳两端与细胞间有明显的距离，这是钩虫卵的主要特征。便秘患者，或粪便排出后放置过久，在钩虫卵内可看到多个卵细胞。在适宜条件下，虫卵内细胞还可发育为幼虫。在单性雌虫感染时，可排出未受精钩虫卵，此种虫卵内含较细颗粒，无屈光性。
由于在厚涂片中钩虫卵形态变化较大，且粪检时除钩虫卵外还常可查见蛔虫卵、鞭虫卵及其他线虫卵等，因此在镜检时应注意加以区别。在厚涂片中，尤其是要注意钩虫卵容易与脱蛋白质膜的受精蛔虫卵混淆。二者主要区别是①卵壳：受精蛔虫卵壳厚呈双线层，而钩虫卵卵壳似乎增厚，但仍是单层。②内含物：钩虫卵内含数个灰色分裂的卵细胞，受精蛔虫卵内含一个卵细胞，由无色微细颗粒状物集于一团，呈一圆形内含物。如果是未脱蛋白质膜的受精蛔虫卵，还可以见到卵壳外凹凸不平的蛋白质膜痕迹。植物线虫卵两端钝圆，卵壳薄，内容物为单细胞期、多细胞期、桑椹期及至子虫期，可与钩虫卵区别。
4．试管滤纸培养法 试管钩蚴培养法检出率高，不仅适用于确诊钩虫感染和虫种鉴定，如用定量粪便培养还可计算感染度。但需新鲜粪便当天进行培养，若粪便存放过久，尤其是冬季气温低于10℃以下时，因虫卵死亡而影响检出结果的准确性。培养结果需3~5天才能观察。
（二）其他检查
粪检阴性时并不能肯定体内无钩虫寄生，如果肠内仅有雄虫寄生、雌虫未到达成熟产卵阶段、幼虫在宿主体内“迁延移行”未达肠腔，粪便就查不到虫卵。此时可试用驱虫方法诊断。
（三）鉴别诊断
钩虫病一般不难诊断。但本病引起的各种消化道症状、贫血和消化道大出血等容易误诊为以下疾病，应加以鉴别：
1．消化性溃疡 上腹部疼痛呈周期性发作并有节律性。胃溃疡多发生在餐后1小时，十二指肠溃疡多在空腹和半空腹时发作，进食可缓解，呈钝痛、灼痛或饥饿样疼痛，常伴有吐酸水、嗳气等症状。钩虫性腹痛虽在上腹部，但多为隐痛，且无节律性，服用抗酸药剂或进食不缓解，常有食欲亢进、异嗜癖等症状，重症者有明显贫血性浮肿面容而非消瘦性面容。
2．肠结核 腹痛部位与钩虫性腹痛不同，多在右下腹和脐周，程度较轻，常在食后诱发，多伴有腹泻，并在便后疼痛缓解。同时可有肠外结核特别是肺结核史，以及伴有明显的消瘦、盗汗、下午发热、面色潮红等结核病症状。
3．慢性结肠炎 可由多种原因引起，该病发病以20~40岁最多，腹泻常为早期症状，反复发作，经久不愈，多伴里急后重。受凉与饮食失调常为发作的诱因。发作期大便呈水样或糊样，混有黏液、脓性黏液或脓血样成分。约1/3病例有血便，偶见大量出血。病人多有中度贫血。钩虫性结肠炎一般病程较短，经粪检钩虫卵阳性或试验性治疗症状改善而得到确诊。
4．其他原因引起的消化道大出血 钩虫病并发消化道大出血，由于无特异性体征，临床上常被误诊为胃、十二指肠溃疡出血、胃肠道肿瘤和门静脉高压出血、胆管出血等。
本病与以上原因引起的消化道出血鉴别要点是①有钩虫病流行区劳动、生活史；②粪便检查可查见钩虫卵或钩蚴；③按其他原因治疗无效，按钩虫病治疗有；④纤维胃镜或钡餐排除胃或十二指肠溃疡、胃癌或其他原因的上消化道出血。